靜電紡絲制備法-3D納米纖維球

以納米纖維研究的日本國(guó)立福井大學(xué)藤田準(zhǔn)教授的研究室使用我司的靜電紡絲設(shè)備成功創(chuàng)建了模仿囊腫立體結(jié)構(gòu)的“納米纖維球”。

模仿囊腫立體構(gòu)造的納米纖維球

<開(kāi)頭>

囊腫是一種多細(xì)胞結(jié)構(gòu)，多為內(nèi)部具有液體和半固體物質(zhì)的球形蓑衣。通常自然治愈，無(wú)害，但有時(shí)也會(huì)變成惡性腫瘤。

因?yàn)榧词鼓軌蛑谱?D細(xì)胞凝聚體也不能形成像細(xì)胞一樣的空心構(gòu)造而導(dǎo)致很難弄清楚囊腫的細(xì)胞行為。

在這項(xiàng)研究中，受控的納米結(jié)構(gòu)為空心納米纖維球。
通過(guò)靜電紡絲（ES）制作了名為“納米纖維球”的模型囊腫。

藻朊酸水凝膠是由具有良好生物相容性和生解性的褐藻類而獲得的天然親水性,并具有陰離子性多糖類，因此在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被廣泛調(diào)查。

由于二價(jià)陽(yáng)離子的存在，藻朊酸鹽容易凝膠化,而交聯(lián)的藻朊酸通過(guò)乙烯二胺四酸（EDA）形成并且容易溶解。
矩陣?yán)w維選擇了生物相容性和柔軟性的聚酯Po（3-羥基丁二烯-o-3-羥基六烯醇）（PHBH）,使用ES模仿細(xì)胞外矩陣（ECM）并制作了具有特定地形的納米纖維。

<材料>

PHBH(3HH＝10.6mol%)

海藻酸鈉（500cps）

氯仿（CHCl3）

氯化鈣（CaCl2）

EDTA
 

<納米纖維球的制作方法>

首先將5w/v%的藻朊酸鈉斷斷續(xù)續(xù)滴到1w/v%CaCl2中,并制作海藻酸水楊酸。接著在銀酸珠上穿過(guò)鋁線,沿著靜電紡絲收集器的旋轉(zhuǎn)軸設(shè)置后進(jìn)行紡絲。

密度和方向由收集器的旋轉(zhuǎn)時(shí)間和旋轉(zhuǎn)速度控制。

每10分鐘6次用10mM EDIA溶液將ES后鈣離子凝膠化的藻朊酸水凝膠洗凈,并將它放置在EDA溶液中一夜，使鈣離子發(fā)生氧化。清洗后用于細(xì)胞培養(yǎng)。

?裝置:NANON
?電壓:29kV
?溶液:15w/v%PHBH-CHCl3

?溶液推進(jìn)量: 0.1ml/h
?噴頭與收集器之間距離:100mm

?最內(nèi)層 紡制時(shí)間45分鐘，旋轉(zhuǎn)速度100rpm（隨機(jī)纖維）

?中間層 紡制時(shí)間25分鐘、旋轉(zhuǎn)速度500rpm（稍弱配向膜）

?最外層 紡制時(shí)間25分鐘，旋轉(zhuǎn)速度1000rpm（強(qiáng)烈配向膜）

<納米纖維球的形態(tài)分析結(jié)果>

?內(nèi)徑3.8mm、外徑4.1mm、內(nèi)部體積230mm3

?從芯鋁收集器上取下時(shí)會(huì)形成兩個(gè)導(dǎo)管，可用于細(xì)胞懸浮液注入。內(nèi)徑0.58mm。

?球體內(nèi)側(cè)為隨機(jī)纖維，表面光滑。纖維直徑1.70±0.41mm，配向參數(shù)0.11±0.06。因?yàn)槔w維被密封，所以雖然是多孔質(zhì)，但是沒(méi)有可供細(xì)胞穿透的間隙。因此，氧氣和營(yíng)養(yǎng)素均可以從外部供給，但細(xì)胞只能通過(guò)管道移動(dòng)。

?球體外側(cè)為朝向圓周方向的配向纖維。纖維直徑1.76±0.57mm，定向參數(shù)0.51±0.07。

?通過(guò)調(diào)整藻朊酸珠的尺寸和旋轉(zhuǎn)速度，可以制作各種類型的球體。

?通過(guò)ATR-FTIR光譜測(cè)量來(lái)確認(rèn)不存在殘留的海藻酸。

?根據(jù)CesSildrop法的水接觸覺(jué)測(cè)定結(jié)果，確認(rèn)通過(guò)進(jìn)行酵素等離子體處理可使疏水性聚合物PHBH親水化。

?為細(xì)胞粘結(jié)提供良好的微觀環(huán)境。

?由于營(yíng)養(yǎng)素和局部氧濃度的差異，長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞形成了高配向結(jié)構(gòu)，朝著管道中心的直徑方向細(xì)。因此，認(rèn)為濃度梯度有可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。

?管道周圍是通過(guò)導(dǎo)電電線使用靜電紡絲法直接紡制的隨機(jī)纖維。

?如果從內(nèi)而外向管道移動(dòng)的細(xì)胞到達(dá)過(guò)多的區(qū)域，纖維結(jié)構(gòu)為防止細(xì)胞向外移就會(huì)像魚(yú)瓶陷阱一樣移動(dòng)。另外，長(zhǎng)期培養(yǎng)層內(nèi)的細(xì)胞會(huì)覆蓋內(nèi)部但沒(méi)有深入纖維。因?yàn)閴Ρ谑欠嵌嗫椎模杂凶銐虻拿芏葋?lái)阻礙細(xì)胞的移動(dòng)。因此，納米球可以提供適當(dāng)?shù)募?xì)胞來(lái)粘結(jié)表面。

?細(xì)胞外矩陣結(jié)構(gòu)的緊密網(wǎng)絡(luò)生成也已明確。可確認(rèn)直徑為225±136mm的薄纖維。比PHBH支架及細(xì)胞本身薄得多，與骨膠原纖維相似，因此認(rèn)為是U-251細(xì)胞產(chǎn)生的ECM纖維。

<結(jié)論>

通過(guò)溶解藻朊酸珠，可以創(chuàng)建新的3D空心納米纖維球。玻璃珠殘留的中空空間和納米纖維的各向異性模仿了細(xì)胞培養(yǎng)模型的囊腫環(huán)境。

另外，PHBH空心納米纖維還提供了用于研究細(xì)胞間和細(xì)胞ECM相互作用的人造環(huán)境培養(yǎng)系統(tǒng)。

這項(xiàng)研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀兄诜治瞿夷[中的生物行為。最終有可能將目光投向惡性性狀轉(zhuǎn)換等臨床上尚未闡明的現(xiàn)象，另外此研究在醫(yī)療領(lǐng)域應(yīng)用上也有巨大的可能性。

<用途>

?囊腫的體外模型（進(jìn)一步調(diào)查ECM在細(xì)胞生物學(xué)中的作用等）

?作為體內(nèi)組織和器官的支架

?開(kāi)發(fā)動(dòng)脈瘤的*佳治療方法

?血栓性動(dòng)脈瘤生長(zhǎng)機(jī)理的分析

?作為非纖維的加工模板來(lái)模仿其他臟器和組織等